Immunoelectrophoresis

Immunoelectrophoresis koristi se za laboratorijsko dijagnostičko otkrivanje monoklonskih antitijela u krvi pacijenta. Monoklonska antitijela su izvedena iz iste stanice i usmjerena su protiv istih antigena. Iz tog razloga treba ih ocijeniti patološkim i, ako se dokažu, govoriti o bolestima kao što je Waldenströmova bolest.

Što je imunoelektroforeza?

Ioni imaju različitu pokretljivost. Ta različita mobilnost čini osnovu elektroforeze. Ove metode odvajaju različite tvari jedna od druge koristeći električna polja i gravitaciju. Dobro poznata metoda na terenu je imunoelektrofereza.

Ovo je kvalitativna dijagnostička metoda koja se koristi za otkrivanje monoklonskih antitijela. Antitijela su imunološki aktivne proteinske tvari iz određene stanične linije. Monoklonska antitijela se zasnivaju na istim B limfocitima i zbog toga su usmjerena protiv jednog epitopa. Svaki prirodni imunološki odgovor na invazivne antigene odgovara poliklonskom odgovoru i stoga je usmjeren protiv različitih epitopa. Monoklonski imunološki odgovor stoga daje indikacije patoloških tjelesnih procesa.

Monoklonska antitijela vežu različite molekule visoke specifičnosti. To vezivanje može se pokazati imunoelektroforezom. Postupak je kvalitativan postupak u laboratorijskoj dijagnostici, a sastoji se od dvije vrste postupka, elektroforeza seruma i imunodifuzija.

Funkcija, učinak i ciljevi

Imunoelektroforeza kombinira metodologiju elektroforeze seruma s imunodifuzijom. Pacijentov serum postavlja se na film agaroznog gela ili celuloznog acetata. Također se primjenjuje kontrolni serum. Nakon primjene slijedi elektroforetsko odvajanje uzoraka. Između linija razgraničenja nanose se antisera, IgG, IgA, IgM, octena kiselina za normalnu elektroforezu i kappa i lambda.

To stvara reakciju s antitijelima u pacijentovom serumu, što stvara linije taloženja. Ovisno o korištenom antiserumu i položaju i obliku pojedinih linija, mogu se izvući zaključci o imunoglobulinama sadržanim laganim lancima kappa ili lambda. U slučaju lambda pojasa, postoje slobodni lagani lanci sastavljeni od antitijela. Laboratorija pruža dodatne dokaze putem rijetkih IgE i IgD, koji omogućuju točno određivanje imunoglobulina. Metoda imunodifuzijske elektroforeze odvija se prema Pierre Grabar i Curtis Williams i odgovara kombinaciji elektroforeze gela agaroze proteina i difuzije antitijela.

Prvo se odvija elektroforeza gela agaroze. Nakon toga, sadržana antitijela difuzno djeluju na skupine antigena i stvaraju lukove taloga. Treba napraviti razliku između ove i Laurell-ove raketne imunoelektroforeze, što odgovara elektroforezi proteina u agaroznom gelu, a svako od njih ima antitijela u određenoj koncentraciji. U gelu postoji malo bazični pufer, koji samo dozvoljava migriranje antigena i koji prisiljava većinu antitijela na izoelektričnu točku izlaganjem malo bazičnoj pH vrijednosti sve dok se ne prestanu elektroforetski kretati.

Na početku raketne imunoelektroforeze nalazi se višak antigena, tako da nastaju topljivi kompleksi antigen-antitijela. Tijekom elektroforeze postoji i vezivanje između antigena i drugih antitijela. Na taj se način u točki ekvivalencije formiraju imunoprecipitati koji nalikuju figurama sličnim raketama čija je visina proporcionalna koncentraciji antigena. Za procjenu testa mjeri se visina taloga.

Ovdje možete pronaći svoje lijekove

Rizici, nuspojave i opasnosti

Otkrivanje monoklonskih antitijela od posebnog je značaja za dijagnozu multiplog mijeloma i Waldenströmove bolesti. Dostavljeni dokazi govore o zloćudnoj degeneraciji imunoloških stanica. Višestruki mijelom odgovara karcinomu koštane srži, za koji je karakteristično zloćudno množenje stanica koje proizvode antitijela u plazmi.

Te plazma stanice stvaraju antitijela i njihove fragmente. Maligne stanice plazme uvijek potječu iz zajedničke stanice prekursora i stoga su genetski identične. Oni proizvode samo monoklonska antitijela. Malignost ove bolesti može odgovarati prekanceroznom stadijumu, ali može dostići i visoko malignu fazu, koja bez liječenja brzo je kobna. Simptomi bolesti proizlaze iz malignog rasta stanica ili iz antitijela i fragmenata antitijela. Najčešći simptomi uključuju bol u kostima, otapanje kostiju i spontane prijelome.

Razina kalcija u krvi često se povećava. Pored toga, nenormalna antitijela često se talože u tkivu i uzrokuju funkcionalne poremećaje u organima, što može dovesti do simptoma kao što su zatajenje bubrega ili ometan protok krvi. Waldströmova bolest je također zloćudna tumorska bolest. Preciznije, radi se o malignoj bolesti limfoma koja se ubraja u sporo progresivne i gotovo asimptomatske B-stanične non-Hodgkinove limfome. U većini slučajeva može se kod bolesti otkriti nenormalna proizvodnja monoklonskog IgM zbog aktivnosti stanica malignih limfoma.

Waldenströmova bolest je po svojstvima vrlo slična multiplom mijelomu, ali obično pokazuje povoljniji tijek. Većina pacijenata s Waldenströmovom bolešću uglavnom je asimptomatska već prema vremenu dijagnoze. Ostali pacijenti rano pokazuju simptome, poput nespecifičnog umora ili perifernih neuropatija, koji nastaju taloženjem monoklonskog IgM-a unutar mijelinskog omotača. Čak i male količine IgM mogu potaknuti polineuropatiju. Kod drugih bolesnika ne javlja se polineuropatija, čak ni u visokim razinama. Pored toga, mogu se pojaviti nespecifični simptomi poput vrućice, neželjenog gubitka kilograma ili noćnog znojenja. Bol u kostima je također karakteristična.

Zbog prekomjerne proizvodnje IgM, krv postaje hiperviskozna, tako da se navedeni simptomi mogu povezati s simptomima hiperviskoznog sindroma. U većini slučajeva, ova sklonost krvarenju očituje se u čestim krvarenjima iz nosa, glavobolji, općenitom nelagodu ili zamagljenom vidu i zvučnim tegobama. Da bi se otkrile zloćudne bolesti ovog tipa, imunoelektrofereza je odavno postala standardni dijagnostički postupak.